产品及特点

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具备以下核心特点：
1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 引物等组分经过优化，灵敏度极高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性强，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，防止与其他生物样本DNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又适用于定量检测，定量检测时的线性范围至少为5个数量级。
6. 本产品支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限科研使用。

方法：

一、DNA提取（样本制备区）
使用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）
（由于阳性对照浓度较高，请在独立区域进行以下稀释操作，以避免污染样品或本试剂盒的其他成分。）
1. 标记6个离心管为7、6、5、4、3、2。
2. 分别用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照（试剂盒提供），充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰备用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照（上步稀释所得），充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰备用。
5. 更换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照（上步稀释所得），充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品，放冰备用。
6. 按照以上操作重复，直到得到6个稀释度的标准曲线样品，放冰备用。若无需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）
若有N个待检样品，请准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中分别加入相应成分（见详细说明书，欢迎向我们索取）。

四、添加模板（模板添加区）
向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）
将PCR管置于PCR扩增仪器样品槽的相应位置，进行扩增反应，扩增程序详见说明书，欢迎向我们索取。

六、结果分析
1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线。应用待测样品的Ct值从标准曲线上推算样品DNA浓度的log值，并得出浓度。
2. 若未制作标准曲线，按以下标准判定结果：阳性对照结果：Ct值<30，呈现明显指数增长，形成典型的S型曲线；阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长和平台期。样本检测结果：Ct值<35，明显指数增长，表明样本中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表明样本未检测出婴儿利什曼虫，结果为阴性；Ct值在35-38范围需复检，如重复实验结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存
本产品需低温运输，保存于-20℃，保质期为一年。阳性对照应单独存放，确保不污染其他试剂。

南宫28NG相信品牌力量，将为您的科研提供最可靠的产品支持和服务。