南宫28NG相信品牌力量的TurboTEV蛋白酶是一种增强型半胱氨酸蛋白酶，源自烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白，其切割特异性为Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly，主要在Gln和Gly之间进行切割。该酶在4°C下保持良好的活性，特异性和稳定性极高，且无需特殊缓冲液，能够在最适合目标蛋白的缓冲体系中有效使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，带有GST和His标签，便于通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂去除标签。其来源为大肠杆菌，具有活性≥10 Units/µg。一单位TurboTEV蛋白酶在30℃下可在1小时内裂解3µg对照底物的85%。

实验方案

1. 在溶液中裂解：
A、配制新鲜的冰冷透析缓冲液，例如：25mM Tris-HCl (pH 8.0)，150-500mM NaCl，和14mM β-巯基乙醇。
B、稀释目标蛋白样品：
(a) 将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL的浓度。若在透析缓冲液中出现聚集，可选择跳过此步。
(b) 保存一小部分未切割的样品用于后续分析。若样品来源于镍柱洗脱且EDTA兼容，可以加入EDTA，浓度为0.5mM。
C、加入TurboTEV蛋白酶，按1:100（w/w）的比例进行配比，即100mg目标蛋白使用10000 Units（1mg）TurboTEV蛋白酶。
D、在4°C下透析过夜（约16小时）。

2. 去除TurboTEV蛋白酶：
A、上柱处理。
B、进行SDS-PAGE分析（可选）。

产品应用

• 蛋白质裂解功能。
• 从重组蛋白中去除融合标签。
• 蛋白质和肽的纯化。

常见问题

1. 关于TEV消化反应的缓冲液条件是否重要？试问其中的以下成分是否会妨碍TurboTEV的切割效率：
(a) 1mM DTT
(b) 10% 甘油
(c) 20mM 组氨酸
(d) 500mM NaCl
(e) 100mM Tris-HCl
(f) β-巯基乙醇？
答：
(a) 1mM DTT可以使用；
(b) 不推荐使用10%甘油；
(c) 不推荐20mM组氨酸；
(d) 不建议使用500mM NaCl；
(e) 不建议使用100mM Tris；
(f) β-巯基乙醇与DTT类似，可适当添加。

2. 在剪切之前，是否需要进行缓冲液交换？
答：可能是必要的。

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